保湿

化妆品功效测试-保湿

一、生化测试-透明质酸酶抑制

基本原理：透明质酸是由真皮层内得成纤维细胞合成，皮肤中较多的透明质酸，能够降低胶原蛋白和弹性蛋白的变性速度，减缓其由可溶性蛋白向不可溶性蛋白的变性速度，改善皮肤细胞间胶体溶液环境，从而使得原有因细胞间产生空间而形成的皱纹得到舒展。

实验操作：1、反应：将透明质酸酶、PBS缓冲液、NaCl溶液、BSA溶液与样本溶液混匀作为培养基，在培养箱中37℃孵育。然后加入透明质酸溶液作为反应开始，在37℃条件下孵育。未经水解的透明质酸用酸白蛋白溶液沉淀。然后将混合物在室温放置，用酶标仪检测该混合物的吸光度。未加酶的测试组作为最大抑制率的对照，抗坏血酸作为阳性对照，每个反应设置3个复孔。2、读数：使用酶标仪在600nm波长下测定吸光度值。3、数据分析。

二、细胞测试

（一）透明质酸含量测试

基本原理：透明质酸在体内发挥保水、维持细胞外空间、调节渗透压、润滑、促进细胞修复的重要生理功能。皮肤中的HA 占人体全部HA 含量的50% ，其主要来源于角质形成细胞和成纤维细胞。本实验通过ELISA试剂盒检测角质细胞上清液中HA含量大小的变化，从而评估待测样本的保湿作用。

实验操作：1、细胞毒性筛查2、透明质酸含量测试：常规培养细胞，将细胞悬液接种于96孔细胞培养板。取出培养板，弃去孔中原培养液，每孔加入含不同浓度的测试样品、空白对照组（不含待测物质）和阳性对照组。弃去孔中原培养液，每孔加入新鲜的培养液。收集上清液，-80℃保存，采用ELISA试剂盒测定HA含量。

表1. 试验分组

3、数据分析：数据采用SPSS进行分析，并以均值±标准差表示，如果p<0.05考虑差异具有统计学意义。

（二）水通道蛋白表达量

基本原理：免疫荧光技术是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体上，与其相应的抗原结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应，其荧光强度可反映蛋白含量。水通道蛋白（aquaporin，AQP）是一类能快速转运水的膜整合蛋白。皮肤上主要分布的水通道蛋白是AQP-3，其具有转运水、甘油、尿素的功能，对皮肤保湿、弹性及损伤后屏障修复功能起着关键性作用。本实验通过UVB 照射构造角质细胞损伤模型后进行给药，利用细胞免疫荧光法定性检测AQP-3 表达情况。

实验操作：1、细胞活性测试。2、角质细胞AQP-3免疫荧光实验：灭菌水稀释聚赖氨酸溶液，将爬片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液进行包被。细胞爬片过夜干燥。加入各浓度待测样本及阳性对照，孵育后弃上清，PBS 清洗后，模型组（M）、阳性对照组（PC）、待测样品组（TA）进行UV光照造模，造模后再加入各浓度待测样本及阳性对照，继续孵育等。3、数据分析：荧光显微镜下拍摄的照片导入Image pro plus，计算各组的平均荧光强度（IOD/AREA）。

三、人体测试

（一）短效保湿（臂区）

基本原理：通过电容法皮肤水分含量测试仪器测试受试者在涂抹前0h、涂抹后2h、4h及8h的皮肤含水量，采用配对样本T检验分别分析测试区域与空白区域在涂抹后各阶段与涂抹前皮肤含水量的显著性差异，评价产品的保湿效果。

实验步骤：筛选合格的受试者，统一清洁手臂前臂内侧，分别画出正方形区域并做好标记；在恒温恒湿的条件下静坐，保持前臂暴露，避免触碰，保持放松，期间不能喝水和饮料。使用角质层含水量测试仪测试试验区域角质层含水量；使用乳胶指套，根据随机表按照使用量涂抹试验产品，并在产品使用后2小时、4小时和8小时分别再进行仪器测量。每个位点测量3次，计算均值。

（二）长效保湿（脸部）