华代生物作为国内领先的致力于发展体外科学的第三方机构，坚持“研发驱动、替代先行”的理念。公司以推动体外替代技术的创新与发展为己任，免疫学中心致力于皮肤、呼吸道和食物致敏的体外评测方法转化和研发。近年来，在有害结局通路（AOP）理念的指导下，参考OECD标准，直接与方法初始开发机构密切合作，在国内率先实验室建立了整合3个AOP通路的方案，即DPRA、Keratinosens和h-CLAT测试。从2018年开始，华代检测中心开始接受委托业务，为客户提供未知皮肤致敏物筛查和毒理学评测的技术服务。

一、 技术方法

采用目前化妆品行业比较公认的“3选2” 方案，分别针对致敏通路中的三个事件展开检测。样品经3个皮肤致敏的体外方法测试，如果至少2个测试结果为阳性，则判定样品可能导致皮肤致敏，如果至少2个结果为阴性，则预测样品不具有皮肤致敏性。

1、DPRA

大多数化学致敏原（半抗原）都能与氨基酸的亲核中心发生结合反应，于是针对分子起始事件（molecular initiating event, MIE）开发出了体外化学分析方法。通过受试物与特征多肽共孵育，采用HPLC分析反应液中多肽损耗评估受试物肽反应性，根据预测模型判断受试物致敏性。

2、KeratinoSens^TM

在角质细胞反应（关键事件1，KE1）阶段，角质细胞受到致敏物刺激后会激活Keap1-Nrf2-ARE反应通路，引起荧光素酶基因表达改变。华代生物在国内首家获得检测专用的转染KerainoSens细胞系，受试物暴露后向其中加入荧光素酶底物，再通过荧光读板机测量荧光强度的变化，根据预测模型对受试物的致敏性进行判断。

3、h-CLAT

树突状细胞反应（关键事件2，KE2）是树突状细胞在捕获抗原后，会发生一系列的特异性变化，如表面标志物改变、炎性因子释放等。h-CLAT利用类树突状细胞THP-1建立检测方法，在THP-1细胞暴露受试物后，细胞表面标志物CD54和CD86表达会发生改变，通过流式细胞仪检测细胞表面标志物变化，依据预测模型对受试物致敏性进行判断。

皮肤致敏AOP

二、开发能力

华代公司从2015年开始建立皮肤致敏的体外解决方案，先后与三项致敏替代方法的初始研发机构宝洁公司、花王公司和奇华顿公司建立了技术合作关系。通过技术研讨、规模化测试、数据积累分析等手段，投入流式细胞仪、高效液相色谱仪和高内涵分析仪等设备200多万元，建立了科学、稳定和可靠的技术能力。已发表论文8篇，论著1部和专利2项。如《直接多肽结合实验组合人细胞系活化实验预测皮肤致敏物的探讨》、《基于THP-1细胞的皮肤致敏体外检测方法》、《基于现有替代方法建立皮肤致敏整合测试策略》、《皮肤模型与THP-1细胞共培养方法预测难溶解物皮肤致敏性的初步研究》等。

三、服务范围

三项体外方法组合使用，适用于化学品、可溶解物质、消毒产品、混合物、植物提取物、医疗器械浸提物、卫生用品浸提物等产品皮肤致敏的测试。特别对于组成复杂的植物提取物和防腐剂，采用“3选2”方案可大大降低原料安全风险，提高产品质量。目前已积累数据数百个，为客户提供丰富的检测经验和数据分享。

高内涵细胞分析仪

流式细胞仪

四、联系方式

华代生物致力于为化妆品产业升级和可持续发展提供安全与功效评测的解决方案。先后推出了“化妆品原料体外生物学大数据项目”，“基于皮肤模型的功效评测手册”，“植物原料皮肤致敏整合测试策略”等项目。业界期待的体外数据将在今年6月的第八届替代大会上隆重发布。

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