舒缓

化妆品功效测试-舒缓

一、细胞测试

（一）细胞活力测试

基本原理：利用SDS刺激HaCaT 角质细胞后，将样品作用于角质细胞，通过检测角质细胞的细胞活力变化，评价样品的舒缓功效。

实验步骤：1、细胞活性测试。2、角质细胞抗SDS刺激测试：常规培养细胞，将细胞悬液接种于96孔细胞培养板。取出培养板，弃去孔中原培养液，除空白对照组外，每孔加入维持培养液，空白对照组加入维持培养液。取出培养板，弃去孔中原培养液，每孔加入PBS清洗，空白对照组、模型组每孔加入维持培养液，其余各组加入含样本或阳性对照的维持培养液。然后每孔加入含MTT的维持培养液。去除孔中液体，每孔加入DMSO，置于振荡器振荡后，在酶标仪570nm波长处测定吸光度。

表1. 试验分组

3、数据分析。数据采用SPSS进行分析，并以均值±标准差表示，如果p<0.05考虑差异具有统计学意义。

（二）炎症因子含量测试

基本原理：炎症是临床中最常见的病症之一，是人体为了确保去除有害刺激并修复受损组织的一种防御反应。当人体免疫细胞在受到致炎因子作用时，一些小分子量的、能在细胞间传递信息的、并且具有特异性免疫调节功能的可溶性蛋白质或多肽通过机体本身分泌出来，并能参与或引起炎症反应，这些物质被称为炎症因子，包括NO、TNF-α、IL-6、PGE-2、IL-1 等。NO、IL-6、TNF-α都是炎症反应中重要的细胞活性因子，它们对细胞炎症都有直接或间接的作用，彼此之间也产生影响。

实验步骤：

二、皮肤模型测试

实验原理：体外重组表皮模型，由人源角质细胞构成，形成具有3维结构重组模型，且具有与人体天然皮肤相类似的结构和功能，广泛应用于皮肤刺激性测试。体外表皮模型修复测试，表皮模型暴露于SDS造成受损，制备表皮损伤模型，在添加受试物后，通过分析表皮模型的组织活性、炎性因子的释放和皮肤模型的组织学观察，评价受试物对损伤后表皮的舒缓作用。

实验步骤：1、皮肤模型准备：将预温的维持培养液加入12孔培养板，把皮肤模型转移至含有维持培养液，放入培养箱培养过夜。2、待测样品与MTT反应：加入MTT溶液和待测样品12孔板，充分混匀，培养箱中孵育，观察是否有蓝色沉淀。3、加样：取测试样品，均匀涂抹表皮模型表面，试验分组和暴露条件（表1），到达规定的暴露时间后，用DPBS 彻底冲洗样品至无残留，然后置于含新鲜维持培养液继续孵育，或进行受试物暴露。4、到达规定的后孵育时间后，将皮肤模型放入孔中，并放入培养箱培养。MTT反应结束后，用打孔器取下表皮组织，移至EP离心管中，每管加入盐酸异丙醇，充分混匀后室温避光放置过夜。每管取溶液于96孔板中，读取OD值。以盐酸异丙醇为空白对照。5、收集表皮模型培养液，-80℃保存，采用ELISA试剂盒检测IL-1α含量。6、将表皮模型置于中性固定液中。常规包埋、切片、HE染色后，显微镜观察形态。

三、人体测试