大乘体外科学连载②一细胞随机迁移分析
- 分类:体外科学
- 作者:大乘之栋
- 来源:华代检测中心
- 发布时间:2020-12-04 13:31
【概要描述】细胞迁移在胚胎发育、免疫监视及伤口愈合等众多生物学过程中起着至关重要的作用。细胞随机迁移是指细胞固有的迁移能力,通常称为细胞移动性。这一基本条件与细胞定向迁移形成对比,后者是细胞向化学或物理信号迁移。
大乘体外科学连载②一细胞随机迁移分析
【概要描述】细胞迁移在胚胎发育、免疫监视及伤口愈合等众多生物学过程中起着至关重要的作用。细胞随机迁移是指细胞固有的迁移能力,通常称为细胞移动性。这一基本条件与细胞定向迁移形成对比,后者是细胞向化学或物理信号迁移。
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实践3R原则,转化先进技术,传播仁慈体外科学理念方法。
【摘要】
细胞迁移在胚胎发育、免疫监视及伤口愈合等众多生物学过程中起着至关重要的作用。细胞随机迁移是指细胞固有的迁移能力,通常称为细胞移动性。这一基本条件与细胞定向迁移形成对比,后者是细胞向化学或物理信号迁移。然而,与布朗粒子不同的是,随机迁移的细胞表现出方向性、持续性,即它们更有可能维持先前方向的运动,即使这个方向是在各向同性环境中随机选择的。因此,建立细胞移动性能的测试方法对于皮肤早期发生、伤口愈合和损伤修复具有实用意义。
【原理和要点】
细胞迁移是一个受严格调控的过程。有些细胞是能动的,有些细胞不是,那些能动的细胞可以通过各种机制进行移动。细胞运动主要有两种模式:一种模式称为间质细胞样,基于胞内肌动蛋白聚合进而形成板状伪足。第二种模式称为阿米巴样,基于快速突起的囊泡,与细胞皮质的突起相对应。物理限制可以改变移动模式。例如,可以通过在预期细胞迁移方向的前缘诱导一个“恒定的囊泡”来“约束”触发快速迁移。肿瘤细胞的特点是表现出各种各样的迁移机制。研究发现,基于微管的突起可以驱动胶质母细胞瘤细胞的迁移。
图1 细胞运行的轨迹分析
可见,建立标准条件用于表征细胞运动非常重要。采用单细胞铺板在涂有细胞外基质蛋白的二维平面上可使细胞表现出随机的细胞迁移。在这种情况下,细胞的主要运动方式为间质样迁移。本方法适用于研究表皮角质细胞、成纤维细胞及其它类型细胞的移动性。可以用定量参数描述位移,如与速度相对应的长度和表示位移方向的角度等。细胞高速和高方向性的行为使之能够随着时间的推移占据更广阔的区域,可以用位移的平方来表征,即随时间变化的表面积。
图2 细胞跟踪和轨迹分析。(A)使用软件分析跟踪单个细胞迁移轨迹。(B)分析细胞迁移的“方向性持续”。
细胞迁移时板状伪足的形成依赖于Arp2/3复合体对分支肌动蛋白网络的持续聚合。基于Arp2/3迁移的主要特征是会驱动细胞持续运动。采用间质样迁移模式,保持前端的领先优势对于迁徙的持续性至关重要,已证明这依赖于大量的细胞骨架反馈回路。因此,除了前面的参数之外,可增加定向持续性的参数,以便严格剖析控制细胞迁移的分子机制和信号通路。细胞迁移的方向持续性不容易计算,如何巧妙地研究单细胞运动轨迹,可联系文后的技术咨询方式。
【实验流程】
细胞随机迁移实验的基本步骤是将单细胞铺板在涂有细胞外基质蛋白的二维平面上,使细胞表现为间质样迁移的运动模式,检测各项参数和进行信号通路分析,其简要流程如下(具体方案可咨询华代公司):
---细胞外基质涂层;
---细胞接种;
---设置图像采集;
---跟踪细胞轨迹;
---分析细胞轨迹。
图3 建立细胞随机迁移实验。(A)将细胞消化,(B)将细胞接种在细胞外基质蛋白包被的8孔板上。(C)细胞孵育2h。(D)将载玻片放置于显微镜下。每隔10min采集图像,持续24h
图3、划痕后不同时段(0、12和20小时)原代HEK迁移。
【注意事项】
1. 可根据研究需要选择不同的皮肤原代或细胞系。
2. 显微镜应具备的功能:相位对比度、温度和二氧化碳控制器、电动工作台、自动控制摄像机,图像捕获和对焦模块。
3. 八孔板的优点是可同时8个平行孔,每孔接种5×103个细胞,如果使用不同的培养皿或细胞,应保持接种数大致一致。
4. 方法的特点是将细胞散布在细胞外基质上,并进行记录细胞在基质上的即刻迁移,而不是细胞利用其随时间分泌和组装产生的细胞外基质上迁移。
5. 细胞密度很重要。如果细胞过多,则细胞间相互作用的增加将使随机细胞运动偏向。
6. 统计分析软件应确保对于非定量数据的识别和数字转换。
7. 信号通路和分析应与定性数据
图4 细胞融合状态不同会影响迁移效果
表 不同 培养材料的细胞接种密度影响迁移效果
【小 结】
细胞的随机迁移是其移动性的一种,不仅存在于正常组织中,在皮肤修复和免疫监视过程中也发挥着重要作用。细胞迁移还表现为表皮-间质转换,趋向性迁移和侵袭,详情且听下回分解。
【参考文献】
1.Gorelik R, Gautreau A.2015. The Arp2/3 inhibitoryprotein arpin induces cell turning by pausing cell migration. Cytoskeleton 72:362–371.
2.Liu YJ, Le Berre M, Lautenschlaeger F, et al.2015.Confinement and low adhesion induce fast amoeboid migration of slow mesenchymal cells. Cell160:659–672.
3.Dang I, Gorelik R, Sousa-BlinC, et al.2013. Inhibitory signalling to the Arp2/3 complex steers cellmigration. Nature 503:281–284.
【系列体外科学连载经华代科学委员会审核】
【体外科学信息】
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